一、无菌操作要求
1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿
专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用
。
3.接种食品样品时，应在进无菌室
前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净
。
4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等
必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.从包装中取出吸管时，
吸管尖部不能触及外露部位
，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖
不得触及试管或平皿边
。
6.接种样品、转种细菌必须在
酒精灯前操作
，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要
通过火焰消毒
。
7.接种环和针在接种细菌前应经
火焰烧灼全部金属丝
，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，
应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸
。
二、无菌间使用要求
1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，
并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门
，另设有0.5~0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，
工作后用2%~3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品
。
3.无菌间使用前后应将门关紧，
打开紫外灯
，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，
进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递
。
5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有
过滤装置
。
三、消毒灭菌要求
微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法。
1.灭菌前准备
（1）所有需要灭菌的物品首先应
清洗晾干
，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
（2）装培养基的三角瓶塞，
用纸包好，试管盖好盖
，
注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
2.装放
（1）干热灭菌器：装放物品
不可过挤且不能接触箱的四壁
。
（2）大型高压蒸气锅：
放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。
3.设备检查
（1）检查门的
开关是否灵活，橡皮圈有无损坏
食品微生物检测要求总结